紫外分光光度計的操作步驟： ①在接通電源前，應對儀器的安全性進行檢查，電源線接線應牢固，接地線通地要良好，各個調節旋鈕的起始位置應該正確，然后再接通電源。
②將靈敏度派或調至“1”檔（放六倍率小）。調彼長調節器至所需波長。
③開啟電源開關，指示燈亮，選擇開關置于“T”，調節透光度“100％”旋鈕，使數字顯示“100.0”左右，預熱20分鐘。
④打開吸收地暗室蓋（光門自動封閉），調節“0”旋鈕，使數字顯示為“00.0”，蓋上吸收地蓋，將參比溶液置于光路，使光電管受光，調節透光度“100％”旋鈕，使數字顯示為“100.0”。
⑤假如顯示不到“100”，則可適當增加電放逐大器靈敏度檔數，但應盡可能使用低檔數，這樣儀器將有更高的穩定性。當改變靈敏度后必須按④重新校正“0”和“100”。
⑥按④連續幾次調整“00.0”和“100”后，將選擇開關置于A，調節吸光度調零旋鈕，使數字顯示“.000”。然后將待測溶液推進光路，顯示值即為待測樣品的吸光度值A。
⑦濃度 C 的丈量。選擇開關由“A”旋至“C”，將標準溶液推進光路，調節濃度旋鈕。使得數字顯示值為已知標準溶液濃度數值。將待測樣品溶液推進光路，即可讀出待測樣品的濃度值。
⑧假如大幅度改變測試波長時，在調整“00.0”和“100”后稍等片刻（因光能量變化急劇，光電管受光后響應緩慢，需一段光響應平衡時間），當穩定后，重新調整“00.0”和“100”即可工作。
紫外分光光度計的留意事項：
①使用前，使用者應該首先了解本儀器的結構和原理，以及各個旋或之功能。
②儀器接地要良好，否則顯示數字不穩定。
③儀器左側下角有一只干燥劑筒，應保持其干燥，發現干燥劑變色應立即更新或烘干后再用。
④當儀器停止工作時，切斷電源，電源開關同時切斷，并罩好儀器。
